【技术】脊髓性肌萎缩症治疗-索伐瑞韦调研分析（上）

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稀有疾病是大类发病率疾病的一般术语。它们是一个在诊断和治疗方面面临更大挑战的疾病领域。它们通常会导致不利的结果，例如个人残疾和生活质量的退化，这给社会带来了负担。根据美国非营利性罕见疾病组织的统计数据，全世界有10,8670种以上的稀有疾病，其中约80％是由遗传缺陷引起的[1]。

基因治疗是一种治疗方法，可以通过纠正或补偿有缺陷的基因的表达来改变活细胞的生物学特征，以实现治疗目的，从而为治疗罕见疾病的治疗提供了新的希望。基因治疗分为两种策略：一种是在体外治疗中，它可以分离患者的体细胞并将遗传物质运输到细胞中，然后将修饰的细胞运回人体以执行其功能；另一种是体内处理，它通过载体遗传物质引入靶细胞，并通过纠正或补充有缺陷的基因来治疗或防止疾病[2]。

近年来，基因疗法在临床实践中取得了长足的进步，世界各地的许多基因治疗药物已被批准用于营销，但是到目前为止，这些药物尚未批准。其中，只有由诺华开发的体内基因治疗（商品名），用于治疗我国家的临床研究。

一

脊柱肌肉萎缩疾病背景

脊柱肌肉萎缩是一种遗传性神经肌肉罕见疾病，主要涉及前脊髓和α运动神经元的退化变化，并且参与了整个体内多个系统，具有高致死性和高残疾率[3]。脊柱肌肉萎缩的典型临床特征的特征是进行性，对称肌肉无力和近端四肢和树干的萎缩。随着疾病的发展，多个系统通常会影响并最终导致死亡。这种疾病是婴儿期和幼儿期的第一大致命遗传疾病，估计每10,000例活生生中有1个。普通人口的载率约为1/50，国内人口的载体率约为1/42，已包括在“第一个罕见病目录”中[4，5]。

近95％的SMA是由纯合缺失或神经元存活基因1（SMN1）引起的。 SMN2基因是SMN1的同源基因，无法完全补偿，导致缺乏SMN蛋白，这不利于运动神经元的发育和存活，从而导致肌肉无力和肌肉萎缩。在严重的情况下，它将影响骨骼肌，呼吸道肌肉和消化道平滑肌等肌肉，从而进一步导致骨骼系统，呼吸系统和消化系统异常，危害生命[6，7]。

在临床诊断中，SMA根据发作年龄，最大运动能力和SMN2拷贝数（表1）分为五个表型，并且SMA恶化，基因拷贝数的降低。其中，SMA1类型在临床上是最严重和最常见的类型。超过90％的患者在20个月大时死亡或需要永久通风，其寿命不超过2岁[8]。

表1脊柱肌肉萎缩的临床分类

对于这种疾病，在全球范围内，只有三种治疗药物在市场上，即诺森兹钠（），（）和（）（表2）。诺卡林蛋白钠已在上一篇公共帐户文章“”“脊柱肌肉萎缩治疗药物 - 核酸钠钠钠的调查和分析”中引入。本文将介绍的相关内容。

表2销售脊柱肌肉萎缩的药物

二

基因治疗药物

（-XIOI，产品名称，R＆D代码AVXS-101）由开发，并于2019年5月获得FDA的批准。它适用于由SMN1基因在2岁以下的SMN1基因引起的SMA儿科患者。被称为“一次性”基因疗法，预计将通过一剂剂量实现生命有效的“可治愈”效果。但是，价格很高，每次注射的价格为212.5万美元（约1300万元人民币）。目前，它在全球55个国家/地区获得了批准，有4,000多名患者接受治疗，并且尚未批准在中国上市[9]。

它是一种基于腺相关病毒（AAV）载体的静脉输注基因治疗悬浮液，而活性成分是一种重组自我弥补的载体，其中双链DNA矢量基因组被包装在由AAV9 蛋白质组成的中。该载体是由巨细胞病毒增强子/鸡肉-β-肌动蛋白启动子的杂合启动子启动的，该转基因含有编码人运动神经元（SMN）蛋白的转基因[10]。

作用的机制是，一次性静脉内给药后，AAV9病毒载体可以通过血脑屏障并将SMN转基因传递到运动神经元核。 SMN基因在靶细胞中形成了无核体圆形DNA，并连续表达SMN蛋白，从而有效防止运动神经元的逐渐丧失并改善患者的肌肉功能（图1）。

图1的作用机理[11]

2.1药物研究

标记的浓度为2.0×1013载体基因组VG/mL。每瓶10 mL的药物含有不少于5.5 mL或8.3 ml的可提取体积。辅助材料包括氯化胺，氯化镁，氯化钠和洛沙糖剂188。它是一种无菌药物，不含防腐剂成分[10]。

病毒载体的生产链接分为上游和下游，上游主要包括细胞扩增，病毒转染和病毒收集；下游主要涉及净化过程。该产品使用HEK 293三个质粒瞬态转染系统。在起始材料的材料控制中，质粒专注于识别，基因组完整性，含量，纯度，宿主DNA残基，内毒素和其他项目。细胞库的重点是识别，纯度，外源性病毒因素，遗传稳定性，人类病毒检测，不育检测，支原体检查和其他项目，以及对其他生物来源的材料的病毒检查[12]。

杂质研究分为与产品相关的杂质和与过程相关的杂质。与产品相关的杂质包括空壳病毒，与过程相关的杂质包括RCAAV，质粒DNA，宿主细胞DNA，宿主细胞蛋白（HCP）和杂质A/B/C。

产品质量控制项目包括识别（活性成分，矢量DNA，衣壳蛋白，AAV9蛋白），总蛋白质，体外相对滴度，总纯度，总杂质，pH，渗透压，无菌，无菌，，，，容器完整性，提取量，病毒污染物，病毒污染物含量，等。

制剂的生产过程包括库存溶液解冻，稀释，无菌过滤，无菌填充，包装/标签和存储/测试。审查报告表明，生产过程不引入与该过程有关的任何杂质，也不包括进一步去除杂质的任何生产步骤，生产中使用的所有辅助材料符合标准，并且内部材料控制标准分别建立。

除性状外，识别（活性成分，蛋白，载体DNA，AAV9蛋白），纯度，杂质，渗透压，pH，pH，不溶性颗粒，滴答物，细菌性内毒素，无菌性等，滴度的确定滴定器包括定量确定药物的能力，并确定药物的能力，并确定固定的细胞内的能力。在SMA转基因小鼠模型中延长小鼠生存时间的准备[13]。

稳定研究发现，当在长期存储温度（-60°C）下冷冻存储时，滴度在第一年就下降了。为了评估外观，pH【技术】脊髓性肌萎缩症治疗-索伐瑞韦调研分析（上），渗透压和纯度，没有发现不利趋势，表明在长期储存温度条件下，衣壳蛋白不会降解。基于稳定性研究结果，产品的保质期为-60℃为12个月，2-8℃可以稳定14天，并且在室温下的存储可以稳定几个小时，使其对光线不敏感[10]。

总结

关于的非临床和临床研究的摘要，请遵循此官方说明的后续文章“ [技术]药物治疗脊柱肌肉萎缩 - 核心维尔研究与分析（第2部分）”。

参考